1. 배지 조성 및 제조방법

12) 포테이토 덱스트로즈 한천배지(Potato Dextrose Agar)

(생 략)

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 5.6±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균하여 식히고 멸균된 10% 주석산을 무균적으로 가하여 pH를 3.5±0.1로 맞춘다. 식힌다. 멸균된 10% 주석산을 무균적으로 가하여 pH를 3.5±0.1로 맞추거나 chloramphenicol을 100 ㎍/mL 농도로 첨가한다.

​

27) 클로스트리디움 퍼프린젠스 한천배지(Clostridium Perfringens Agar)

(생 략)

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 pH 7.5±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균 후 배지를 50℃정도로 식혀 난황액(시액 8)을 10%가 되도록 첨가한다. 카나마이신을 200 ㎍/mL 농도로, 난황액(시액 8)을 10%가 되도록 첨가한다.

​

7) Fraser Listeria 배지(Fraser Listeria Broth)

(생 략)

Disodium Phosphate 9.6 g 12.0 g

Ferric citrate 0.5 g (추가)

(생 략)

<신 설>

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 121℃에서 15분간 멸균하여 50℃로 식힌 후 다음의 Supplement를 차례로 여과멸균하여 가한다.

Supplement ; Nalidixic Acid 0.02 g, Acriflavin HCl 0.021 g 0.025 g, Lithium Chloride 3 g

​

78) Preston 배지(Preston broth)

(생 략). Laked Horse Blood 52.6 mL 50 mL 과 지시대로 녹인 Preston Supplement와 Campylobacter Growth Supplement를 첨가한다.

- Preston Supplement 조성

(생 략)

- Campylobacter Growth Supplement 조성

Sodium pyruvate 250 mg

Sodium metabisulphite 250 mg

Ferrous sulphate(hydrated salt) 250 mg

​

102) DRBC 한천배지

Enzymatic digest of animal and plant tissues 5 g

D-Glucose 10 g

Potassium dihydrogen phosphate 1 g

Magnesium sulfate 0.5 g

Dichloran 0.002 g

Rose bengal 0.025 g

Chloramphenicol 0.1 g

Agar 12∼15 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 121℃에서 15분간 멸균한다.

​

103) DG18 한천배지

Casein enzymatic digest 5 g

D-Glucose 10 g

Potassium dihydrogen phosphate 1 g

Magnesium sulfate 0.5 g

Dichloran 0.002 g

Glycerol anhydrous 0.025 g

Chloramphenicol 0.1 g

Agar 12∼15 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 121℃에서 15분간 멸균한다.

​

104) Half Fraser 배지(Half Fraser Broth)

Tryptose 10 g

Beef Extract 5 g

Yeast Extract 5 g

Sodium Chloride 20 g

Disodium Phosphate 12.0 g

Monopotassium Phosphate 1.35 g

Esculin 1 g

Ferric citrate 0.5 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹여 121℃에서 15분간 멸균하여 50℃로 식힌 후 다음의 Supplement를 차례로 여과멸균하여 가한다.

Supplement ; Nalidixic Acid 0.01 g, Acriflavin HCl 0.0125 g, Lithium Chloride 3 g

105) PALCAM 배지(PALCAM Broth)

Peptone 23 g

Mannitol 10 g

Sodium Chloride 5 g

Starch 1 g

Ferric Aammouium Citrate 0.5 g

Esculin 0.8 g

Dextrose 0.5 g

Lithium Chloride 15 g

Phenol Red 0.08 g

위의 성분을 증류수 1,000 mL에 녹이고 pH 7.2±0.2 로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다. 이를 50℃로 식히고 다음의 Supplement를 차례로 여과멸균하여 가한다.

Supplement : Polymyxin B sulfate 0.01 g, Acriflavin 0.005 g, Ceftazidime 0.02 g

2. 미생물 시험법

4.5 세균수

(현행과 같음)

4.5.1 일반세균수

가. 표준평판법

(현행과 같음)

1) 시험조작

(현행과 같음). 응고시킨 페트리접시는 뒤집어 35±1℃에서 48±2시간(시료에 따라서 30±1℃ 또는 35±1℃에서 72±3시간) 배양한다. 48±2시간(시료에 따라서 30±1℃ 또는 35±1℃에서 72±3시간) 배양한다(단 규정된 배양시간 전 일지라도 규격을 초과하는 집락이 계수되어 부적합 판정이 예상되는 경우 배양시간을 단축하여 판정할 수 있다).

4.7 대장균군

4.7.1 정성시험

가. 유당배지법

1) (현행과 같음)

2) 확정시험

(현행과 같음). BGLB배지에서 35～37℃로 48±3시간 동안 배양하였을 때 배지의 색이 갈색으로 되었을 때에는 반드시 완전시험을 실시한다. 가스생성여부와 관계없이 반드시 완전시험을 실시한다.

3) 완전시험

확정시험의 Endo 한천배지(배지 5)나 EMB한천배지(배지 6)에서 전형적인 집락 1개 또는 비전형적인 집락 2개 이상을 보통한천배지(배지 8) 또는 Tryptic Soy 한천배지(배지 40)에 접종하여 35∼37℃에서 24±2시간 동안 배양한다. 보통한천배지 또는 Tryptic Soy 한천배지(배지 40)의 집락에 대하여 그람음성, 무아포성 간균이 증명되면 완전시험은 양성이며 대장균군 양성으로 판정한다.

4.8 대장균

(현행과 같음)

4.8.1 정성시험

가. 한도시험

추정시험이 양성일 때에는 해당 EC 발효관으로부터 EMB 배지에 접종하여 35～37℃에서 24±2시간 배양한 후 전형적인 집락을 보통한천배지 또는 Tryptic Soy 한천배지(배지 40)에 접종하여 35∼37℃에서 24±2시간 배양한다. 보통한천배지 또는 Tryptic Soy 한천배지(배지 40)에서 배양된 집락을 취하여 그람염색을 실시하여 그람음성, 무아포성 간균을 확인한 후 생화학 시험을 실시하여 대장균 양성으로 판정한다.

- 보통한천배지 또는 Tryptic Soy 한천배지에 ------------. 보통한천배지 또는 Tryptic Soy 한천배지에서 -----------------------

​

4.8.2 정량시험

가. 최확수법

1) 제1법

(현행과 같음). 가스발생을 인정한 발효관을 대장균(E. coli) 양성이라고 판정하고 별표 1 또는 별표 2 최확수표에 따라 검체 1 mL 또는 1 g 중의 대장균수를 산출한다. 가스발생을 인정한 발효관에 대하여 4.8.1 정성시험 가. 한도시험에서 추정시험 양성일 때와 같이 행하여 대장균의 유무를 확인한 다음 별표 1 또는 별표 2 최확수표로부터 검체 1 mL 또는 1 g 중의 대장균수를 산출한다.

2) 제2법 (패각)

(현행과 같음)

3) 제3법 (유가공품·식육가공품·알가공품)

가) 최확수법

(현행과 같음)

나 ) 대장균 확인시험

최확수법에서 가스생성과 형광이 관찰된 것은 대장균 추정시험 양성으로 판정하고 대장균의 확인시험은 추정시험 양성으로 판정된 시험관으로부터 EMB배지(또는 MacConkey Agar)에 이식하여 37℃에서 24시간 배양하여 전형적인 집락을 관찰하고 그람염색, MUG시험, IMViC시험, 유당으로부터 가스 생성시험 등을 검사하여 최종확인한다. IMViC시험 등을 검사하여 최종확인한다. (현행과 같음).

나. ～ 다. (현행과 같음)

별표1. ～ 별표2. (현행과 같음)

4.9 유산균수

4.9.1 유산균수

유산균수 측정방법은 MRS 배지(배지 87), BL 한천배지(배지 15) 또는 BCP첨가 평판측정용배지(배지 11) MRS 배지(배지 87) 또는 BL 한천배지(배지 15)를 사용하여 유산균의 집락을 계수한다. (생 략).

MRS 배지(배지 87)와 BCP첨가 평판측정용배지(배지 11)는 MRS 배지(배지 87)는 일반세균수의 표준평판법에 준하여 시험하고, BL 한천배지(배지 15)는 각 희석 시험용액 0.1 mL씩을 BL한천배지(배지 15) 2매 이상에 접종하여 멸균초자봉으로 도말한다. 시료가 접종된 페트리디쉬는 35〜37℃에서 48〜72±3시간 혐기배양(발효유류의 경우 호기 배양 가능)한다. 혐기배양한다.

4.11 살모넬라(Salmonella spp.)

가. 증균배양

1) (현행과 같음)

2) 소, 돼지도체: 소, 돼지도체: 제8. 일반시험법 5. 원유·식육·식용란의 시험법 5.2. 식육 시험법 5.2.3. 세균학적 시험법 가. 시료채취 및 방법 1) 도체 가)소 및 나)돼지의 시료채취 방법에 따라 멸균가아제나 스폰지로 시료를 채취한 후 멸균백에 넣고 50 mL BPW를 최종용량이 40 mL 되게 BPW를 넣은 다음 균질화 시킨 후 36±1℃에서 18～24시간 배양한다. -------------------------------------. (현행과 같음)

4.12 황색포도상구균(Staphylococcus aureus)

4.12.1 정성시험

가.～나. (현행과 같음)

다. 확인시험

분리배양된 평판배지상의 집락을 보통한천배지(배지 8) 또는 Tryptic Soy 한천배지(배지 40)에 옮겨 35～37℃에서 18～24시간 배양한 후 그람염색을 실시하여 포도상의 배열을 갖는 그람양성 구균을 확인한 후 coagulase 시험을 실시하며 24시간 이내에 응고유무를 판정한다.

​

4.12.2 정량시험

가. (현행과 같음)

나. 확인시험

계수한 평판에서 5개 이상의 전형적인 집락을 선별하여 보통한천배지(배지 8) 또는 Tryptic Soy 한천배지(배지 40)에 접종하고 35～37℃에서 18～24시간 배양한 후 4.12.1 정성시험 다. 확인시험에 따라 시험을 실시한다.

다. (현행과 같음)

​

4.13. 장염비브리오(Vibrio parahaemolyticus)

4.13.1 정성시험

가. ～ 나. (현행과 같음)

다. 확인시험

분리배양된 평판배지상의 집락을 LIM 반유동배지(배지 18), 2% NaCl을 첨가한 보통한천배지(배지 8) 또는 2% NaCl을 포함한 Tryptic Soy 한천배지(배지 40)에 각각 접종한 후 35～37℃에서 18～24시간 배양한다.

​

4.13.2 정량시험

가. (현행과 같음)

나. 확인시험

계수한 평판에서 5개 이상의 전형적인 집락을 선별하여 2% NaCl을 첨가한 보통한천배지(배지 8) 또는 2% NaCl을 포함한 Tryptic Soy 한천배지(배지 40)에 접종하고 35～37℃에서 18～24시간 배양한 후 4.13.1 정성시험 다. 확인시험에 따라 시험을 실시한다.

​

다. 균수계산

확인 동정된 균수에 희석배수를 곱하여 계산한다. 예로 10-1에서 평균집락수가 50개이었고, 이 중 5개의 집락을 확인한 결과 4개의 집락이 장염비브리오로 동정되었을 경우 50×(4/5)×10=400으로 계산한다.​

​

4.14 클로스트리디움 퍼프린젠스(Clostridium perfringens)

4.14.1 정성시험법

가. (현행과 같음)

나. 분리배양

카나마이신을 200 ㎍/mL 농도로 가한 난황 첨가 Clostridium perfringens 한천배지(배지 27) 또는 난황첨가 TSC 한천배지(배지 41)에 Clostridium perfringens 한천배지(배지 27) 또는 TSC 한천배지(배지 41)에 증균액을 접종하여 35～37℃에서 18～24시간 혐기배양 한 결과 Clostridium perfringens 한천배지에서 직경 2mm 정도의 약간 돌기된 유황색으로 주변에 불투명한 백색환이 있는 집락 또는 TSC 한천배지에서 불투명한 환을 가지는 황회색 집락은 확인시험을 실시한다.

​

다. 확인시험

분리배양된 평판배지상의 집락을 보통한천배지(배지 8) 또는 Tryptic Soy 한천배지(배지 40)에 옮겨 35∼37℃에서 18∼24시간 혐기배양한 후 그람염색을 실시한다. 또 동시에 보통한천배지 또는 Tryptic Soy 한천배지(배지 40)를 35∼37℃에서 18∼24시간 호기 배양하여 균의 비발육을 확인한다.

​

4.14.2 정량시험법

가. (현행과 같음)

나. 확인시험

계수한 평판에서 5개 이상의 전형적인 집락을 선별하여 보통한천배지(배지8) 또는 Tryptic Soy 한천배지(배지 40)에 접종하고 35∼37℃ 에서 18∼24 시간 혐기배양한 후 4.14.1 정성시험법 다. 확인시험에 따라 실시한다.

다. (현행과 같음)

4.15 리스테리아 모노사이토제네스(Listeria monocytogenes)

가. 증균배양

(현행과 같음). 유가공품, 식육가공품, 알가공품, 식육 및 가금류는 25g(mL)을 Listeria 증균배지(배지 35) PALCAM Broth 또는 UVM-modified Listeria 증균배지(배지 36) Listeria 증균배지(배지 35), PALCAM 배지(배지 105), UVM-modified Listeria 증균배지(배지 36) 또는 Half Fraser 배지(배지 104) 225 mL에 접종하여 30℃에서 24±2시간 동안 증균 배양한 후, 배양액 0.1 ml을 10ml의 Fraser broth에 배양액 0.1 mL을 10 mL의 Fraser 배지(배지 37)에 접종하여 35∼37℃에서 24∼48시간 2차 증균을 실시한다. (생략)

​

나. (현행과 같음)

​

다. 확인시험

그람염색 후 그람양성 간균이 확인되면 hemolysis, motility, catalase, CAMP test와 mannitol, rhamnose, xylose의 당분해시험을 실시한다. 이 결과 β-hemolysis를 나타내고 catalase 양성, motility 양성을 나타내며 CAMP test 결과 Staphylococcus aureus(ATCC 25923)에서 양성, Rhodococcus equi(ATCC 6939)에서 음성으로 나타나는 동시에 당분해시험 결과 mannitol 비분해, rhamnose 분해, xylose 비분해의 결과를 보일 경우 Listeria monocytogenes 양성으로 판정한다. hemolysis, motility, catalase, mannitol, rhamnose, xylose의 당분해시험, Phosphatidylinositol phospholipase C(PI-PLC) 반응시험을 실시한다. 이 결과 β-hemolysis를 나타내고 catalase 양성, motility 양성을 나타내며, 당분해시험 결과 mannitol 비분해, rhamnose 분해, xylose 비분해, PI-PLC 반응시험 시 집락 주위에 불투명한 환이 보일 경우 Listeria monocytogenes 양성으로 판정한다 (단, 분리배양 시 ALOA 한천배지를 사용한 경우, PI-PLC 반응시험을 생략할 수 있다). Hemolysis 에 대한 부가 시험으로 CAMP test를 할 수 있으며, 그 결과 Staphylococcus aureus(ATCC 25923)에서 양성, Rhodococcus equi(ATCC 6939)에서 음성으로 나타나는 경우 Listeria monocytogenes 양성으로 판정한다. <신 설>

4.16 장출혈성대장균

(현행과 같음)

가. ～ 나. (현행과 같음)

다. 확인시험

TC-SMAC배지에서는 sorbitol을 분해하지 않은 무색집락을, BCIG 한천배지에서는 청록색 집락 각 5개 이상을 취하여 보통한천배지 또는 Tryptic Soy 한천배지에 옮겨 35～37℃에서 18～24시간 배양한다. (생 략)

4.18 바실루스 세레우스(Bacillus cereus)

4.18.1 정성시험

가. (현행과 같음)

나. 확인시험

각 배지에서 전형적인 집락을 선별하여 보통한천배지(배지 8) 또는 Tryptic Soy 한천배지(배지 40)에 접종하고 30℃에서 24시간 배양한다. (생 략)

​

4.18.2 정량시험

가. (현행과 같음)

나. 확인시험

계수한 평판에서 5개 이상의 전형적인 집락을 선별하여 보통한천배지(배지 8) 또는 Tryptic Soy 한천배지(배지 40)에 접종하고 30℃에서 18～24시간 배양한 후 4.18.1 정성시험 나. 확인시험에 따라 확인시험을 실시한다.

다. (현행과 같음)

4.19 캠필로박터 제주니/콜리(Campylobacter jejuni/coli)

가. ～ 나. (현행과 같음)

다. 확인시험

Modified Campy blood free 한천배지상에서 원형 또는 불규칙한 형태로서 반투명한 흰색 또는 투명한 집락, Abeyta-Hunt Blood 한천배지(배지 49)상에서 무지개빛 광택 집락, CCA 및 BCA 한천배지에서는 불규칙한 가장자리를 가지고 점액이 있으며 회색인 평평한 집락(24～48시간 배양 후 용혈은 나타나지 않으며 분홍색이나 노란-회색집락이 나타나기도 한다), Preston 한천배지에서는 부드러운 모서리를 가진 불규칙한 원모양을 형성하는 반투명의 흰색집락(일부 균주는 황갈색 또는 약한 핑크색 집락을 형성)을 선별하여 혈액한천배지에 신속히 접종하여 42℃에서 24～48시간 배양한다. 미호기적으로 배양한다. (생 략).확인된 균에 대하여, 캠필로박터 제주니는 hippurate 분해 양성, 황화수소 비생성, nalidixic acid 감수성, cephalothin 내성, 25℃에서 비생육, 42℃에서 생육 여부 등을 확인하며, 캠필로박터 콜리는 hippurate 분해 음성, nalidixic acid 감수성, cephalothin 내성, 25℃에서 비생육, 42℃에서 생육 여부 등 생화학시험을 실시한다. 황화수소 비생성, 25℃에서 비생육 등을 확인하며, 캠필로박터 콜리는 hippurate 분해 음성, 25℃에서 비생육 여부 등 생화학시험을 실시한다.

4.20 클로스트리디움 보툴리눔(Clostridium botulinum)

가. 증균배양

(현행과 같음). 1～2 g 또는 1～2 mL의 검체를 2개의 Cooked Meat 배지(배지 33) 15 mL에 접종하여 35∼37℃에서 7일간 배양하고 7일간 혐기배양하고 또 2개의 TPGY배지(배지 50)에 같은 방법으로 접종하여 26℃에서 7일간 배양한다. 7일간 혐기배양한다.(생 략)

나. ～ 다. (현행과 같음)

라. <삭 제>

1) <삭 제>

2) <삭 제>

4.21 크로노박터(Cronobacter spp.)

가. 증균배양

검체 5관에서 검체 각 60 g을 무균적으로 채취하여 검체 60 g 또는 60 mL를 무균적으로 채취하여 540 mL의 멸균증류수에 가한 후 35∼37℃에서 18∼24시간 증균배양한다. (현행과 같음).

나. ～ 다. (현행과 같음)

4.22 ～ 4.25 (현행과 같음)